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TUNEL细胞凋亡

2018-06-02| 发布者: admin| 查看: 127

TUNEL细胞凋亡检测(TUNEL cell apoptosis assay)是一种灵敏度高、快速、简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

TUNEL细胞凋亡检测

1.概念和原理

TUNEL细胞凋亡检测(TUNEL cell apoptosis assay)是一种灵敏度高、快速、简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

TUN EL(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)即末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法,也称DNA断裂的原位末端标记法。

细胞在发生凋亡时,生物素( biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的基因组DNA3-OH末端,而生物素叉可与连接了辣根过氧化酶的链霉亲和素( streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,会产生很强的颜色反应(深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,故正常细胞很少被染色。

2.科研和临床应用

检测人娄和动物肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡;了解细胞凋亡的机制,探索疾病发生机制与治疗途径。

3.标本采集、保存、运输

悬浮生长的培养细胞的甩片、涂片、冰冻切片、常规石蜡切片:3-5张,样本;贴壁生长的培养细胞:无菌培养瓶密封常温运输,2-3天内到达;组织块:以10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定。



 

 

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