致力于提升客户品牌形象、实现客户商业目标!-post/show_post

Commitment to enhance customer brand image,customer business goals!

凝胶迁移实验

2018-06-02| 发布者: admin| 查看: 117

凝胶迁移实验是一种研究DNA结合蛋白质和与其相应的DNA序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。

凝胶迁移实验

1.概念及原理

      凝胶迁移实验是一种研究DNA结合蛋白质和与其相应的DNA序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结台蛋白质,目前已用于研究RNA结合蛋白质和特定的RNA序列的相互作用。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。通常将纯化的蛋白质或细胞粗提液和32P同位素标记的DNARNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结台的探针,当蛋白质与一条人工合成的特异的DNARNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白质转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNARNA结合的蛋白质转录因子。标记的探针根据研究的结合蛋白质的不同,可以是双链或者是单链。

       当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白质,可用纯化蛋白质,部分纯化蛋白质或核蛋白质提取物。在检测RNA结合蛋白质时,依据目的RNA结合蛋白质的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白质,也可用细胞核或胞质提取物。竞争实验中采用含蛋白质结台序列的DNARNA片段和寡核苷酸片段(特异)和其它非特异片段,来确定DNARNA结合蛋白质的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

2.科研和临床应用

  研究DNA结合蛋白质和其相关的DNA结合序列间的相互作用;DNA定性和定量分析;研究RNA结合蛋白质和特定的RNA序列的相互作用。

3.标本采集、保存、运输

组织样品:新鲜组织放入液氮或-80℃保存,组织不少于200mg,冷冻运输;

培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白质保护剂,混匀后保存于-80℃冰箱,冷冻运输;

血液细胞标本:以抗凝管保存全血或以淋巴细胞分离液分离单核细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白质保护剂,混匀后保存于-80℃保存,避免反复冻融,冷冻运输;

血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融,冷冻运输。



 

 

 

上一篇: 双向蛋白电泳 下一篇: 双向凝胶电泳

最新评论

昵称: 邮箱: