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蛋白表达与纯化

2018-06-02| 发布者: admin| 查看: 110

上海冷泉蛋白表达服务优点是实验周期短、成本低、产量高。蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。在基因工程技术中占有核心地位。

蛋白表达与纯化

      上海冷泉蛋白表达服务优点是实验周期短、成本低、产量高。蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。在基因工程技术中占有核心地位。

 

重组蛋白表达与纯化服务

主要方式:大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、哺乳动物细胞表达系统、植物细胞表达系统

 

主要方式介绍

1、原核表达系统:将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。

    冷泉科研人员建立了成熟的大肠杆菌表达及纯化服务平台,提供包括各种重组蛋白以及其复合物在大肠杆菌中的表达与纯化服务。

    服务项目:

    重组质粒构建;

    重组表达测试;

    可溶性表达条件测试;

    小规模蛋白表达和纯化(2L培养基培养产物);

    大规模蛋白表达和纯化(10L以上)。 

原核表达一般程序:获得目的基因=》准备表达载体=》将目的基因插入表达载体中(测序验证)=》转化表达宿主菌=》诱导靶蛋白的表达=》表达蛋白的分析=》扩增、纯化、进一步检测。

优点:原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统,也是最经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点;

缺点:主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠,得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

 

2、酵母表达系统:酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统,由于兼具原核以及真核表达系统的优点,正在基因工程领域中得到日益广泛的应用,应用此系统可高水平表达蛋白,且具有翻译后修饰功能,故被认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。

    冷泉科研人员建立了成熟的酵母表达纯化服务平台,提供优质的重组蛋白在毕赤酵母和酿酒酵母中的表达与纯化服务。

    服务项目:

    重组酵母表达质粒构建;

    重组质粒电转化;

    重组表达子筛选;

    小规模蛋白表达和纯化(2L培养基培养产物);

    大规模蛋白表达和纯化(10L以上)。 

优点:酵母蛋白表达系统以甲醇毕赤酵母为代表,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近高等真核生物,分泌蛋白易纯化,易实现高密发酵等优点。

缺点:为部分蛋白产物易降解,表达量不可控。

 

3、哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统:哺乳动物细胞表达外源重组蛋白可利用质粒转染和病毒载体的感染。利用质粒转染获得稳定的转染细胞需几周甚至几个月时间,而利用病毒表达系统则可快速感染细胞,在几天内使外源基因整合到病毒载体中,尤其适用于从大量表达产物中检测出目的蛋白。

优点:是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式,最容易保留生物活性。

缺点:是表达量通常较低,稳定细胞系建立技术难度大,生产成本高。

 

 


 



 

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