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基因敲除

2018-06-02| 发布者: admin| 查看: 117

基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术,针对某个序列已知但功能未知的序列,改变生物的遗传基因,令特定的基因功能丧失作用,从而使部分功能被屏障,并可进一步对生物体造成影响,进而推测出该基因的生物学功能。

基因敲除

   基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术,针对某个序列已知但功能未知的序列,改变生物的遗传基因,令特定的基因功能丧失作用,从而使部分功能被屏障,并可进一步对生物体造成影响,进而推测出该基因的生物学功能。

    基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的建立,使得对基因靶位时间和空间上的操作更加明确、效果更加精确、可靠,它的发展将为发育生物学分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段,具有广泛的应用前景和商业价值。基因敲除技术主要应用于动物模型的建立,而最成熟的实验动物是小鼠,对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。


基因敲除大鼠

         可通过Cas9TALEN技术进行基因敲除大小鼠及条件敲除小鼠的制备工作,获得Founder仅需2个月、获得稳定遗传的F1代仅最快仅需4个月。

TALEN基因敲除大鼠定制

TALEN 技术简介

         TALENtranscription activator-like (TAL) effector nucleases)靶向基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具。研究发现,植物细菌Xanthomonas sp.TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用TAL的序列模块,可组装识别任意DNA序列的模块化蛋白和重组核酸酶,在特定位点打断目的基因DNA序列,进而在该位点进行DNA操作,如Knock-outKnock-in或点突变。

CRISPR/Cas9技术

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic RepeatsCRISPR)是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制,其中IICRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。在这一系统中,crRNACRISPR
derived RNA
)通过碱基配对与tracrRNAtrans-activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA,其中Cas9HNH核酸酶结构域剪切互补链,其RuvC-like结构域剪切非互补链。

研究表明,CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和人类基因组特定基因位点进行精确编辑,这其中包括诱导多能干细胞 iPS等,不仅如此,CRISPR/Cas系统还可以同时针对同一细胞(ES)中的多个位点能实现多靶点同时酶切,人们运用该技术成功获得斑马鱼等模式动物基因敲除模型,使得多个基因敲除、敲入成为可能。

服务项目及周期:

a.靶点设计、载体构建、显微注射、Founder检测;

b.提供3只以上F1代小鼠;

c.Fouder仅需2个月、F1代最快仅需4个月。



 



 

 

 

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